試劑配制
(1)0.2%EDTA配制：將0.2gEDTA溶解于100ml Hank液中，封裝高壓消毒，置0～4℃保存。
(2)胰酶加EDTA配制：胰酶0.25g加PBS(pH7.0)200ml，濃度為0.125%，EDTA0.2g加PBS(pH7.0)100ml，濃度為0.2%。各取40ml混合，分裝后置0～4℃冰箱保存，使用前過濾即可使用。
2、實(shí)驗(yàn)方法
(1)將組織切成薄片，置于試管。
(2)首先加入EDTA液5ml，室溫下0.5小時(shí)，離心棄之。
(3)加入胰酶-EDTA液5～10ml，置37℃恒溫水浴30min，間斷振蕩3～5次。
(4)用300目尼龍網(wǎng)過濾，離心沉淀1000rpm/min，5分鐘。再以生理鹽水洗2～3次，離心500～800rpm，1～2分鐘。
(5)將細(xì)胞固定或低溫保存?zhèn)溆?/span>溫和組織處理器。
化學(xué)處理法獲得的細(xì)胞存活率低，細(xì)胞產(chǎn)量較低，細(xì)胞碎片和細(xì)胞聚集量不穩(wěn)定。
(四)美天旎組織解離系統(tǒng)
1、使用方法：將20~4000mg大小樣本或0.3~10ml樣本與組織所對(duì)應(yīng)得解離試劑盒共同加入至組織解離管并旋緊管蓋;把解離管安裝至gentleMACS溫和組織處理器上，啟動(dòng)程序并運(yùn)行，最終得到溫和組織處理器或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
2、適用組織：
(1) 制備溫和組織處理器
• 人類或小鼠的腫瘤組織
• 小鼠或大鼠的新生心臟組織
• 神經(jīng)組織
• 小鼠的脾臟，肺，固有膜，肌肉，上皮組織，肝臟
• 人類或小鼠的皮膚等
(2)制備組織勻漿
• 從新鮮或凍存樣本中提取DNA，RNA
• 提取蛋白
• 分離細(xì)胞器
• 測(cè)定病原菌滴度等
3、產(chǎn)品特點(diǎn)
(1)溫和有效：
gentleMACS使用專門的一次性分離管(C管和M管)，管蓋上帶有特殊設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)子和定子，對(duì)樣本減少損傷，保證了細(xì)胞活性，同時(shí)得到了高回收率。
(2)一個(gè)機(jī)器支持多種用途：
生成溫和組織處理器和制備亞細(xì)胞物質(zhì)。C管可以得到單細(xì)胞懸液，用于細(xì)胞分選，分析或者是培養(yǎng)。M管可以將組織和細(xì)胞勻漿，用于分離亞細(xì)胞物質(zhì)(如蛋白，核酸)。
(3)無菌分離：
C管和M管的中心都有一個(gè)用隔膜封閉的小孔，能保證在無菌條件下，在封閉系統(tǒng)中安全地處理樣品。
(4)用戶安全：
針對(duì)一些感染性樣本處理采用封閉系統(tǒng)處理，比如細(xì)菌病原感染的樣本，完全不需要打開試管蓋，即可添加酶以及其他溶液，或者取出分離出來的細(xì)胞或者勻漿溶液，保護(hù)實(shí)驗(yàn)室操作人員安全。
(5)全自動(dòng)和標(biāo)準(zhǔn)化：
自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)化程序已經(jīng)設(shè)置好時(shí)間，速度和操作方向，只要將樣本材料和適合的溶液(如緩沖液，培養(yǎng)基等等)加入試管內(nèi)，把試管頭朝下安裝即可運(yùn)行程序。
(6)結(jié)果可靠：
標(biāo)準(zhǔn)化流程操作，減少人為操作誤差，使結(jié)果有高度可重復(fù)性。
(7)便捷靈活：
超凈臺(tái)上即可操作，方便安裝。儀器樣本容量靈活(0.3~10ml)，標(biāo)本大小20~4000mg。
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