單細(xì)胞的高通量微液滴測(cè)序Drop-seq技術(shù)是可分析數(shù)千個(gè)單細(xì)胞的快速應(yīng)用方法，可將各細(xì)胞包裹在納升級(jí)微滴中，進(jìn)行RNA雜交生成mRNA轉(zhuǎn)錄物，進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析。

　　液滴微流控Drop-Seq技術(shù)的應(yīng)用可將細(xì)胞懸浮液與帶有分子條形碼的微珠懸浮液泵匯合并形成層流，再與油相匯合形成單層流，然后再通過與油液相融合形成單分散的微滴，包裹住細(xì)胞和小球，完成核糖核酸的雜交，分解微滴，釋放核糖核酸雜交物，制備細(xì)胞基因表達(dá)譜，進(jìn)一步分析mRNA逆轉(zhuǎn)錄的來源。

單細(xì)胞高通量微液滴測(cè)序的操作方法：

　　1.準(zhǔn)備樣品：從組織中分離細(xì)胞，制備細(xì)胞浮游液的分子條形碼的微珠浮游液。

　　2.制備微滴：將細(xì)胞浮游液和微珠浮游液泵送到芯片上，與油聚集形成單分散的微滴，將各細(xì)胞和微珠一起包裹在同一微滴中進(jìn)行測(cè)序。

　　3.細(xì)胞RNA的雜交：裂解微滴內(nèi)的細(xì)胞，會(huì)釋放出其mRNA，并與其分子條形碼進(jìn)行雜交。

　　4.分子細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄：分解微滴，釋放mRNA的雜交，開始逆轉(zhuǎn)錄，形成mRNA的逆轉(zhuǎn)錄STAMPS。

　　5.PCR的擴(kuò)張：在核酸外切酶的作用下，將各mRNA的逆轉(zhuǎn)錄像物切斷，用PCR擴(kuò)張核酸，擴(kuò)大其基因信息。

　　6.序列分析：使用各種生物信息工具對(duì)其進(jìn)行序列分析測(cè)序。

　　液滴微流控制程序可通過快速分離微小體積樣品，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)數(shù)千個(gè)細(xì)胞的平行高通量分析，通常每秒可以產(chǎn)生1000個(gè)微滴，每個(gè)微粒的體積只有1nL，降低了實(shí)驗(yàn)成本。