單細(xì)胞的分離是單細(xì)胞測序領(lǐng)域的一個新嘗試，利用單細(xì)胞分離儀的應(yīng)用來篩選目的B細(xì)胞并進(jìn)行測序，為發(fā)現(xiàn)新的抗體藥物邁出了重要的一步。

　　作為全基因組測序的一種方法，單細(xì)胞RNA測序被廣泛地應(yīng)用于單細(xì)胞水平面上來識別細(xì)胞的類型和變異狀況。利用細(xì)胞標(biāo)記CD27和細(xì)胞活性染料的單細(xì)胞分離設(shè)備，能夠分離出單個活性的B細(xì)胞，從而對分離的單細(xì)胞基因狀況進(jìn)行分析表達(dá)，并與靜息記憶的B細(xì)胞進(jìn)行比較，可在單細(xì)胞水平研究基因表達(dá)上發(fā)現(xiàn)差異化。

　　在mCD40L-3T3中批量刺激人的幼稚記憶B細(xì)胞培養(yǎng)6天。采集CD27-PE和CellTrackerGreen對細(xì)胞進(jìn)行染色。對PE/FITC雙陽性細(xì)胞的篩選應(yīng)用單細(xì)胞分離儀，單細(xì)胞可被分選至96孔聚合酶鏈反應(yīng)板內(nèi)，在進(jìn)行分離之前，4ul/孔裂解物被預(yù)先放置在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)板上，經(jīng)cDNA合成分析，其中百分之97為單細(xì)胞分離。

　　其次，通過擴(kuò)大VH和VL抗體的變化區(qū)域的特異性基因或全轉(zhuǎn)錄組文庫制備的第二代測序獲得序列，參照靜息記憶b細(xì)胞BCR抗體表現(xiàn)資料組進(jìn)行比較分析b細(xì)胞激活基因的差異c每個孔只有一套BCR轉(zhuǎn)錄本，而通過測序分析確定VH和VL抗體的質(zhì)量充分表明只有一個細(xì)胞被分入了PCR管。

　　綜上所述，被分離出的單細(xì)胞的效率同時也證實了經(jīng)過預(yù)處理和設(shè)門標(biāo)準(zhǔn)所獲取的B細(xì)胞是活性的。

　　此外，分離出的單細(xì)胞cDNA還可應(yīng)用于隨后的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫制備和其免疫球蛋白輕重鏈可變區(qū)域的完整PCR。單細(xì)胞分離儀還提供了一個全新的桌面型單細(xì)胞分離平臺，能夠與下游的單細(xì)胞測序分析試驗進(jìn)行無縫對接。